Коляда А.К.
ГУ «Институт геронтологии имени Д.Ф. Чеботарева НАМН Украины», Киев, Украина;
Данный адрес e-mail защищен от спам-ботов, Вам необходимо включить Javascript для его просмотра.
Целью данной работы было разработать метод определения метилирования промоторных регионов гена паркина-2, который участвует в патогенезе Болезни Паркинсона (БП). Болезнь Паркинсона – второе по частоте встречаемости нейродегенеративное заболевание. Частота встречаемости БП в популяции среди лиц старше 60 лет составляет 2 %.
Диагностика заболевания сильно затруднена в молодом возрасте, так как первые симптомы заболевания проявляются в среднем в 50-60 лет. В связи с этим разработка диагностических методов, основанных на изучении генома, чрезвычайно актуальна.
Нами была разработана методика определения степени метилирования региона ДНК размером 400 п. н., который расположен в промоторной области гена паркина и является коровой частью СрG островка. Этот регион содержит сайты связывания многих транскрипционных факторов, что было показано нашими биоинформационными исследованиями. Таким образом, у нас есть основания полагать, что данный регион непосредственно влияет на степень и топологию экспрессии данного гена в организме.
Метод основан на анализе кривых плавления ДНК в высоком разрешении, полученных в результате ПЦР в реальном времени. ПЦР проводится с образцами ДНК обработанными бисульфитом, что обеспечивает замену не метилированного цитозина на тимин.
Наши исследования показали высокую эффективность данного метода детекции метилирования ДНК и перспективность его использования в связи со сравнительной простотой методики.